trizol法提取rna
Trizol法是一种常用的RNA提取方法，其基本步骤和原理如下：
基本原理
细胞裂解 ：Trizol试剂中的异硫氰酸胍作为强变性剂，能迅速破坏细胞膜，释放细胞内的核酸和蛋白质。抑制RNase活性：
Trizol中的成分在裂解细胞的同时，能有效抑制细胞内的RNA酶（RNase）活性，保护RNA不被降解。
相分离：
在特定pH条件下，DNA、RNA和蛋白质在酚-氯仿混合物中的溶解度不同，它们会被分离到不同的相中，其中RNA位于上层水相。
RNA沉淀与纯化：
通过加入异丙醇等有机溶剂，从上层水相中沉淀出RNA。随后，用乙醇洗涤RNA沉淀以去除残留的有机溶剂和盐类，最终得到纯度较高的RNA。
实验步骤
准备试剂与材料：
包括Trizol试剂、氯仿、异丙醇、75%乙醇（用DEPC处理过的水配制）、无RNase的水或0.5%SDS（同样用DEPC处理过的水配制）等。
匀浆处理
组织样本：每50-100mg组织加入1ml Trizol，用匀浆器匀浆或在液氮中磨碎后加入Trizol。
贴壁细胞：每10cm²面积加入1ml Trizol，用移液器吸打直至裂解液中无明显沉淀。
悬浮细胞：每5×10^6个细胞中加入1mL的Trizol，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。
加入氯仿：
将Trizol裂解液转入EP管中，加入氯仿，盖上盖子，用力震荡15秒，然后室温静置2-3分钟，之后离心10-15分钟。
分离水相：
取上层水相置于新EP管中。
加入异丙醇：
按照每1ml Trizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，室温放置10分钟，然后离心10分钟。
洗涤：
按照每1ml Trizol加1ml 75%乙醇进行洗涤，离心5分钟，弃上清。
干燥与溶解：
让沉淀的RNA在室温下自然干燥，然后用Rnase-free water溶解RNA沉淀。
注意事项
在整个提取过程中要注意避免外源酶的污染，操作时需戴好口罩和手套。
加氯仿后要手动大力摇管15秒，避免使用振荡器以防DNA亲水基团与水相结合造成DNA污染。
取水相时不要贪多，使用小枪头缓慢吸取，避免扰乱分层。
异丙醇沉淀后，上下颠倒混匀10次左右，室温沉淀10分钟，沉淀时间不宜过长以免盐污染。
清洗两遍后，离心一分钟将管壁液体甩下去，再用枪头吸干，以便更快干燥。
RNA检测
电泳检测：通过电泳检测28S、18S、5S条带的完整性和比值，优质的RNA通常28S条带明亮清晰。
吸光度检测：测定样品在260nm和280nm的吸光值，OD260/OD280在1.8-2.0范围通常表示RNA质量好。
以上步骤和注意事项可以帮助您更有效地使用Trizol法提取RNA。